废水检测

依据 HJ 347.1-2018《水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法》、HJ 347.2-2018《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》，用于地表水、地下水、生活污水、工业废水中粪大肠菌群检测。粪大肠菌群是水体粪便污染指示菌，可评价水体受粪便污染程度，常用于污水排放、医疗废水、地表水监测。滤膜法适合低、中浓度水样，结果以菌落数 CFU/L 表示；多管发酵法适合高浓度、浑浊水样，结果以最大可能数 MPN/L 表示。

一、HJ 347.1-2018 滤膜法

原理

水样通过0.45μm 无菌滤膜真空过滤，滤膜截留粪大肠菌群；将滤膜贴于 MFC 选择性培养基上，44.5℃恒温培养，粪大肠菌群生长形成蓝色菌落，直接计数，换算单位体积水样中菌落数量。

2. 仪器、耗材与培养基

仪器：高压蒸汽灭菌锅、44.5℃恒温培养箱、真空抽滤装置、无菌滤器

耗材：0.45μm 无菌微孔滤膜、无菌镊子、无菌稀释瓶、无菌移液管

培养基：MFC 培养基

无菌水：用于样品稀释

3. 实验步骤

样品采集与保存 采样瓶提前灭菌；水样含余氯时，采样时加入硫代Na₂SO₄中和余氯；样品 10℃以下冷藏，6h 内完成检测。

样品稀释（按需） 预估菌落数，选择合适过滤体积；理想计数区间：滤膜菌落20～60 个，总菌落≤200 个。浓度过高水样用无菌水逐级稀释。

无菌过滤 无菌操作，将滤膜装好，取定量水样真空抽滤；过滤结束，无菌水冲洗滤器。

培养 用无菌镊子取出滤膜，贴在 MFC 培养基平板上，避免产生气泡；44.5℃±0.5℃恒温培养 24h±2h。

菌落计数 计数滤膜上蓝色菌落，计算粪大肠菌群浓度。

4. 结果计算

C=N*1000/V

C：粪大肠菌群，CFU/L

N：滤膜上蓝色菌落数量

V：过滤水样体积，mL

5. 质控要点

空白试验：无菌水全程过滤培养，不得出现阳性菌落。

阳性 / 阴性对照菌株验证培养基有效性。

二、HJ 347.2-2018 多管发酵法

原理

采用乳糖蛋白胨培养基，37℃初发酵，粪大肠菌群分解乳糖产酸产气；将阳性管转接到 EC 培养基，44.5℃复发酵，确认产酸产气为粪大肠菌群阳性。根据阳性管组合，查 MPN 最大可能数表，计算粪大肠菌群 MPN 值。

2. 仪器、耗材与培养基

仪器：高压灭菌锅、37℃培养箱、44.5℃恒温水浴 / 培养箱

耗材：带倒管的发酵试管、无菌移液管、稀释瓶

培养基：三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基、单倍乳糖蛋白胨培养基、EC 培养基

3. 实验步骤（常用 15 管法）

样品采集：同滤膜法，冷藏 6h 内检测，余氯加硫代Na₂SO₄中和。

样品稀释：高污染水样做梯度稀释。

初发酵试验 无菌接种：5 支三倍浓缩培养基试管各加 10mL 水样；5 支单倍培养基各加 1mL 水样；5 支单倍培养基各加 0.1mL 水样。 37℃±0.5℃培养 24h±2h；产酸（变黄）、产气（倒管气泡）记为阳性管。

复发酵确认试验 挑取初发酵阳性 / 疑似阳性试管，接种至 EC 培养基，44.5℃±0.5℃培养 24h±2h，产酸产气判定粪大肠菌群阳性。

查 MPN 表：根据阳性管数量，查表换算粪大肠菌群 MPN/L。

4. 质控要点

空白：无菌水接种，无阳性管。

阳性、阴性菌株同步做对照试验。

三、滤膜法与多管发酵法对比表

四、关键注意事项

全程无菌操作，防止环境杂菌污染，造成假阳性。

温度控制严格，44.5℃是粪大肠菌群特征温度，温度偏差会造成结果错误。

样品保存时限严格，采样后 6h 内检测，超时样品失效。

含余氯水样必须添加硫代Na₂SO₄中和；重金属干扰可添加 EDTA。

生物废弃物必须灭菌处理，防止微生物扩散。